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    大鼠睪酮(T)ELISA試劑盒原理和說明書

    發(fā)布時間: 2015-01-30  點擊次數(shù): 1017次

    大鼠睪酮(T)ELISA試劑盒原理操作注意事項

    1. 試劑盒保存在2-8℃,使用前室溫平衡20 分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結(jié)晶,這屬于正?,F(xiàn)象,水浴加熱使結(jié)晶*溶解后再使用。

    2. 實驗中不用的板條應(yīng)立即放回自封袋中,密封(低溫干燥)保存。

    3. 濃度為0 的S0 號標準品即可視為陰性對照或者空白;預(yù)處理后的樣本無需稀釋,直接取50μL 加樣即可。

    4. 嚴格按照說明書中標明的時間、加液量及順序進行溫育操作。

    5. 所有液體組分使用前充分搖勻。

    試劑盒組成

    名稱96孔配置48孔配置備注

    微孔酶標板12 孔×8 條12 孔×4 條無

    標準品0.3mL*6 管0.3mL*6 管無

    生物素1mL 0.5mL 無

    檢測抗體-HRP 10mL 5mL 無

    20×洗滌緩沖液25mL 15mL 按說明書進行稀釋

    底物A 6mL 3mL 無

    底物B 6mL 3mL 無

    終止液6mL 3mL 無

    封板膜2 張2 張無

    說明書1 份1 份無

    自封袋1 個1 個無

    注:標準品(S0-S5)濃度依次為:0、20、40、80、160、320 pg/mL

    試劑的準備

    20×洗滌緩沖液的稀釋:蒸餾水按1:20 稀釋,即1 份的20×洗滌緩

    沖液加19 份的蒸餾水。

    洗板方法

    1. 手工洗板:甩盡孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,靜置1min 后甩盡孔內(nèi)液體,在吸水紙上拍干,如此洗板5 次。

    2. 自動洗板機:每孔注入洗液350μL,浸泡1min,洗板5 次。

    大鼠睪酮(T)ELISA試劑盒原理操作步驟

    1. 從室溫平衡20min 后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。

    2. 設(shè)置標準品孔和樣本孔,標準品孔各加不同濃度的標準品50μL;

    3. 待測樣本孔先加生物素10μL,再加待測樣本50μL;

    4. 隨后標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標記的檢測抗體100μL,用封板膜封住反應(yīng)孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

    5. 棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液,靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復(fù)洗板5 次(也可用洗板機洗板)。

    6. 每孔加入底物A、B 各50μL,37℃避光孵育15min。

    7. 每孔加入終止液50μL,15min 內(nèi),在450nm 波長處測定各孔的OD 值。

    結(jié)果判斷

    繪制標準曲線:在Excel 工作表中,以標準品濃度作橫坐標,對應(yīng)OD 值作縱坐標,繪制出標準品線性回歸曲線,按曲線方程計算各樣本濃度值。

    大鼠睪酮(T)ELISA試劑盒原理試劑盒性能

    1. 準確性:標準品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R 值,大于等于0.9900。

    2. 靈敏度:zui低檢測濃度小于1.0 pg/mL。

    3. 特異性:不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。

    4. 重復(fù)性:板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于15%。

    5. 貯藏:2-8℃,避光防潮保存。

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