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    提取原代細(xì)胞的方法與詳細(xì)步驟

    發(fā)布時間: 2022-08-11  點(diǎn)擊次數(shù): 5936次

    原代細(xì)胞是通過一定的方法如酶法或機(jī)械法或生長法使細(xì)胞從人體和動物的母體器官、組織或液體中分離出來,并在受控環(huán)境條件下分離的細(xì)胞在體外或其他人體和動物體內(nèi)生長。

     

    原代細(xì)胞的提取方法詳細(xì)步驟:

    1.整個操作要在潔凈通風(fēng)的超凈臺下進(jìn)行,所有的器材要高壓消毒。

     

    2.根據(jù)BALB/c小鼠的體重,將小鼠置于盛有75%乙醇的燒杯內(nèi),這一步不僅可以消毒,也可以讓小鼠體毛浸濕,后續(xù)剃去皮毛的時候不會沾到剪刀或組織上。

     

    3.用鑷子輕輕挑起小鼠的心臟,裝有PBS的注射器插入心尖,同時在右心耳處剪開一個小口,緩慢推動注射器,隨著心臟的跳動,將體內(nèi)的血液沖洗出來。

     

    4.取出小鼠的肺部組織,將肺組織切成小米粒樣的大小,置于預(yù)冷的HBSS中反復(fù)沖洗幾次。

     

    5.將小米粒大小的肺組織置于培養(yǎng)瓶中(培養(yǎng)瓶前一天用1%明膠溶液包被培養(yǎng)面,4度過夜,小鼠處理前,將培養(yǎng)瓶放置培養(yǎng)箱中,使其溫度恢復(fù)至37度),置于培養(yǎng)箱37度的環(huán)境下,消化4個小時。

     

    6.消化4小時后,加入培養(yǎng)基(添加培養(yǎng)基,可以是正常培養(yǎng)時的2倍量),繼續(xù)培養(yǎng)24小時(繼續(xù)培養(yǎng)的時間可根據(jù)細(xì)胞貼壁情況適當(dāng)調(diào)整)。

     

    7.24小時后,取出肺組織,鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài),換液。

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    8.原代細(xì)胞的提取和培養(yǎng)是很慢的過程,一般需等到24小時后,才能在鏡下看到些許細(xì)胞群,一周到兩周后才會看到鵝卵石樣的排列情況。

     

    9.原代細(xì)胞2-3天換液一次,因?yàn)閮?nèi)皮細(xì)胞生長形成單層時,會出現(xiàn)接觸抑制現(xiàn)象。所以,內(nèi)皮細(xì)胞生長接近單層時就可以傳代了,不要等到長得非常滿。


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